Что такое пцр в гинекологии

Взятие гинекологического мазка с последующим исследованием его с помощью ПЦР открывает возможности для диагностики инфекций, передаваемых половых путём. Открыто данное исследование было в 80-х годах 20 века. Ученый, разработавший его, получил Нобелевское вознаграждение. Открытие позволяет узнавать возбудителя заболеваний при его минимальной концентрации в половых путях. Высокая точность инновационной ПЦР-диагностики делает её незаменимым исследованием во многих сложных клинических случаях.

Методика исследования

Суть метода полимеразной цепной реакции заключается в размножении участка ДНК. Порой для возникновения симптомов определённых заболеваний необходима мизерная концентрация бактерий или вирусов. Большинство микробиологических исследований не могут обнаружить патогенные организмы в таком разведении, а тем более их с точностью подсчитать. В таких случаях только и выручает метод активного полимеразного наращивания.

ПЦР-диагностика требует для исследования участок ДНК, который подвергается клонированию. К биологическому материалу добавляют различные реагенты, которые комплиментарно достраиваются к участкам выделенного генетического материала. Многократное преумножение ДНК позволяет определить не только род, но и вид бактериологического или вирусного материала. Уточнение вида возбудителя делает лечение максимально эффективным и этиотропным.

Мазки ПЦР в гинекологии позволяют выделить возбудителей хламидиоза, гонореи, микоплазмоза, уреаплазмоза и многих других опасных инфекций. Часто эти заболевания долго существуют в скрытых, латентных формах и долго не проявляются клиническими симптомами. ПЦР позволяет выявить их на ранних стадиях и наиболее своевременно начать лечение.

Среди явных преимуществ полимеразной реакции выделены:

  1. Высокая точность определения природы патогенного микроорганизма.
  2. Возможность выделения вируса или бактерии при мизерных их концентрациях в биологическом материале.
  3. Анализы проводятся достаточно быстро.
  4. Заражение некоторыми микроорганизмами можно выявить только с помощью ПЦР. Вирус иммунодефицита также возможно выделить иди подтвердить с помощью данного диагностического мероприятия.

Исследование в гинекологии

В гинекологической практике мазок на ПЦР используется довольно широко. Ведь он позволяет выявить возбудителей большинства воспалительных заболеваний женских половых органов наружной и внутренней локализации. Анализ проводят женщинам, активно живущим половой жизнью, беременным пациенткам и проходящим прегравидарную подготовку.

  • Мазок ПЦР на ИППП нередко выявляет не только опасные бактериальные инфекции, но и заражение вирусами герпеса или папилломы человека. Последние и вовсе являются онкогенными провокаторами, излюбленным местом которых является ткань шейки матки.
  • ПЦР помогает выявить хламидии у беременных женщин, которые не обследовались на данную инфекцию до зачатия. Бактерия может вызывать различные уродства и пороки развития плода, а также вовсе прекращать его развитие. Носительство хламидий может долгое время не проявляться, быть выявлено лишь во время беременности как причина внутриутробной гибели зародыша. Но и при своевременном обнаружении бактерий у женщин «в положении» предоставляется возможным провести лечение без урона для матери и плода.

Является ошибочным мнение, что взятие мазков ПЦР на ИППП при беременности создает угрозу выкидыша. Соскоб для исследования действительно берут из шейки матки, но таким образом, что не затрагивают растущий эмбрион. К тому же, данная анатомическая область по длине составляет около 4 см вне беременности и несколько уменьшается на поздних сроках гестации. Это позволяет достаточно безопасно взять материал для исследования.

Увеличивают достоверность анализа некоторые простые правила, которые следует соблюдать женщинам перед исследованием:

  1. Пациенткам рекомендуется не мочиться 2-3 часа до выполнения соскоба из шейки матки.
  2. За день до взятия материала необходимо отменить прием антибактериальных и бактериостатических средств.
  3. Вне беременности лучше сдавать мазок в середине менструального цикла. Неблагоприятным периодом считается время до начала менструального кровотечения или сразу после него.
  4. 2-3 дня не рекомендуется использовать локальные средства контрацепции или любые другие вагинальные медикаменты.
  5. Сутки до исследования нельзя иметь половые отношения.
  6. Накануне взятия пробы запрещается принимать душ и обмывать наружные половые органы.
  7. Нельзя брать соскоб из шейки матки в тот же день, когда проводилось кольпоскопическое исследование.

Довольно простые рекомендации позволят наиболее точно определить заболевание, передающееся половым путем, по генетическому материалу его возбудителя.

Показания для ПЦР

Полимеразная реакция как метод диагностики представляет собой новый и инновационный способ идентификации микроорганизмов. К его помощи активно прибегают в следующих случаях:

  1. При установлении причин бесплодия. Невозможность зачать ребенка часто связана с инфекцией половых органов, которую тяжело распознать обычными способами. Латентное течение многих инфекций определяет склонность к прерыванию беременности, несостоятельности имплантации плодного яйца.
  2. При установленной природе инфекционного возбудителя ПЦР проводится для выяснения фазы заболевания: острой или хронической.
  3. Мазки ПЦР у женщин берут в случае тяжело протекающих беременностей. Внутриутробные инфекции, приобретенные до беременности и в ее активное течение, вызывают задержку развития и гибель плода. Рождение детей с аномалиями развития заставляет обследовать мать повторно в послеродовом периоде.
  4. В ходе диагностической процедуры возможно установить также чувствительность и устойчивость микроорганизмов к антибиотикам.

Несмотря на кажущуюся сложность, проведение полимеразной реакции продолжатся не более 4 дней. Это время необходимо для построения полноценной молекулы ДНК, которую удается идентифицировать с конкретным микроорганизмом. Взятие биологического материала как субстрата для анализа и вовсе занимает до 5 минут.

Результат ПЦР-метода имеет два варианта интерпретации: позитивный либо негативный:

  • Положительный ответ полимеразной реакции подтверждает наличие в материале микробных следов, а также указывает род и вид возбудителя.
  • Отрицательный результат говорит о стерильности биологического материала, отсутствии бактерий и вирусных частиц.

На основе расшифровки мазка врач определяется с методикой лечения. Этиотропные антибиотикотерапия или противовирусное лечение позволяют быстро и бесследно очистить микрофлору от возбудителя опасных инфекций. Своевременная диагностика не позволяет навредить и растущему плоду во время беременности матери – при проведении терапевтических курсов эрадикации возбудителей инфекций, передающихся половым путем.

Мазок на заболевания урогенитальной сферы — один из самых распространенных и информативных методов анализа в современной медицине. С его помощью можно выявить не только банальные воспаления, но и предупредить развитие онкологических заболеваний. Несмотря на надежность и доступность метода, не все женщины осознают необходимость регулярного посещения гинеколога и сдачи анализов и нередко обращаются к врачу только в запущенных случаях.

Показания к назначению анализа мазка у женщин

Каждая женщина хоть раз в своей жизни, посещая гинеколога, сдавала мазок на микрофлору или скрытые инфекции. Мазок берется со стенок влагалища, цервикального канала и шейки матки. В лабораторных условиях проводится микроскопическое исследование клеток, содержащихся в биологическом материале. Такой анализ позволяет оценить состояние эпителиальных клеток матки и влагалища, выявить патогенные микроорганизмы и заболевания, передающиеся половым путем. Мазок желательно сдавать регулярно, раз в год, даже если у женщины нет видимых поводов для беспокойства, поскольку многие инфекции в течение длительного времени могут не вызывать никаких симптомов.

В обязательном порядке назначается мазок в тех случаях, когда женщина жалуется на зуд и жжение в области половых органов, необычные выделения из них, внезапную боль внизу живота. Как правило, эти признаки указывают на наличие какого-либо заболевания, диагностировать которое можно только с помощью анализа мазка. Кроме того, желательно провести исследование биоматериала в том случае, если у женщины произошел незащищенный контакт с малоизвестным ей партнером и есть риск заразиться инфекционным заболеванием, передающимся половым путем.

Читайте также:  Почему упало либидо у женщины

Также врач-гинеколог назначает обязательную сдачу анализа мазка женщинам, планирующим беременность, готовящимся к ЭКО или другим процедурам искусственного оплодотворения (ВРТ). Женщинам, ожидающим ребенка, анализ мазка проводится трижды на всем протяжении срока, поскольку инфекции способны передаваться от матери к ребенку, осложнять роды или вызывать выкидыш.

Типы анализов мазка

В гинекологии существует несколько типов анализа мазка в зависимости от вида исследования.

  1. Самым распространенным является мазок на флору или общий мазок , при помощи которого врач определяет так называемую чистоту влагалища у женщины. Что он показывает? Этим способом можно определить состояние клеток эпителия и выявить наличие заболеваний, вызванных патогенными микроорганизмами, таких как вагинит, кандидоз (молочница), вагиноз, цервицит.
    В результате проведения бактериоскопического исследования также диагностируются некоторые заболевания, передающиеся половым путем — гонорея, трихомониаз. В основе анализа лежит способность разных микроорганизмов окрашиваться в разные цвета в зависимости от степени устойчивости к воздействию антибиотиков. Эта способность была открыта датским ученым Г.К. Грамом. В результате окрашивания биоматериала выявляются грамположительные (грам+) микроорганизмы, имеющие большую чувствительность к антибиотикам, и грамотрицательные (грам—), отличающиеся более тонкой и сложной в строении оболочкой и низкой чувствительностью к препаратам. Грамотрицательные микроорганизмы способны вызвать различные заболевания женской половой сферы.
    Врач-лаборант в процессе проведения анализа под микроскопом подсчитывает количество по-разному окрашенных микроорганизмов, лейкоцитов, определяет форму бактерий, их размеры и расположение. В некоторых случаях исследуются неокрашенные (нативные) мазки, что позволяет обнаружить жгутиковые формы трихомонад. Кроме того, в рамках мазка на флору может проводиться так называемый посев на микрофлору. Он используется в тех случаях, когда возбудитель заболевания из-за его малой концентрации не может быть обнаружен под микроскопом и для определения рода и вида бактерий. В этом случае биоматериал, взятый из половых органов женщины, помещают в специальную питательную среду на основе желатина, и через определенное время изучают результат.

Появление на питательном субстрате колоний микроорганизмов говорит о наличии заболевания. Метод посева также используется для определения стратегии лечения, поскольку во время созревания колонии можно выяснить, к воздействию каких групп антибиотиков она особенно неустойчива.

  1. Мазок на скрытые инфекции . К скрытым инфекциям относят группу болезней, которые могут бессимптомно протекать на протяжении нескольких месяцев или даже лет, вызывая осложнения, а некоторых случаях — даже бесплодие. На сегодняшний день наиболее достоверным способом выявления скрытых инфекций является исследование мазка при помощи ПЦР (полимеразной цепной реакции). Этот метод используется для диагностики инфекций, не обнаруживаемых в общих мазках. Для проведения анализа берется секрет из шейки матки, влагалища или мочеиспускательного канала и производится многоэтапное повышение концентрации нуклеиновой кислоты и копирование отдельных фрагментов ДНК присутствующих в мазке микроорганизмов. В результате врач может установить видовую и родовую принадлежность всех патогенных бактерий и их способность вызывать развитие заболеваний. В большинстве случаев ПЦР-анализ применятся при подозрении на наличие заболеваний, передающихся половым путем и имеющих на ранних стадиях практически бессимптомное течение. Преимуществами метода являются:
  • высокая точность определения возбудителя инфекции;
  • возможность определения именно наличия вируса, а не продуктов его жизнедеятельности или распада;
  • возможность постановки точного диагноза на основе всего одной клетки микроорганизма.
  1. Мазок на онкоцитологию, или тест по Папаниколау (пап-тест) , позволяет выявить наличие онкологических заболеваний в шейке матки на ранних стадиях и вовремя начать терапию. Пап-тест определяет большинство воспалительных заболеваний, дисплазию эпителия и злокачественные образования. Сдавать этот мазок рекомендуется ежегодно всем женщинам в возрасте от 21 до 65 лет. В случае если у женщины наблюдаются нарушения менструального цикла, воспалительные процессы цервикального канала, бесплодие, врач назначит мазок на онкоцитологию в обязательном порядке. Также рекомендуется пройти пап-тест при диагностировании диабета, ожирения 2–3 степени, в период планирования беременности, при приеме гормоносодержщих препаратов и наличии в организме вирусов генитального герпеса и папилломы.
    При анализе мазка можно получить пять типов результата в зависимости от наличия и степени патологии. Первый тип — это отрицательный показатель, говорящий о том, что никаких отклонений от нормы в организме женщины нет, и она полностью здорова. При втором типе присутствует воспалительное заболевание, требующее лечения. Третий тип свидетельствует о наличии в эпителии единичных клеток с аномальным строением ядра. Четвертый тип — подозрение на злокачественное образование или эрозию шейки матки, генитальный герпес, папиллломовирусную инфекцию, паракератоз. Пятый тип — наличие онкологического заболевания, требующего незамедлительного лечения. Следует помнить, что мазок показывает только степень изменения клеток, но не причину, их вызвавшую. Для постановки диагноза необходимы результаты других анализов, включая биопсию, кольпоскопию и гистологическое исследование.
    Если в мазке будут найдены атипичные клетки, то в заключении будет об этом написано, а также будет указан тип изменений. Если в расшифровке мазка на цитологию нет особых примечаний, это говорит о том, что в ходе исследования никаких патологий обнаружено не было.

Подготовка к исследованию

При выборе дня для взятия мазка нужно учитывать менструальный цикл. Желательно сдавать анализ перед началом менструации или через несколько дней после ее окончания (оптимальный срок — пятый день), чтобы избежать попадания крови в мазок. Хотя процедура взятия мазка и не слишком сложна, все же необходимо заранее принять некоторые дополнительные меры, чтобы обеспечить чистоту результата. Подготовка к мазку на инфекции у женщин заключается в следующем:

  1. Не использовать вагинальные свечи, тампоны, мази перед анализом.
  2. Отказаться от спринцевания.
  3. При наличии воспалительного заболевания, сопровождающегося обильным выделением секрета необходимо сначала провести лечение и только после полного выздоровления сдавать мазок.
  4. Воздержаться от половых контактов в течение одного-двух дней до сдачи анализа.
  5. Не использовать средства интимной гигиены накануне и в день процедуры.
  6. Воздержаться от опорожнения мочевого пузыря в ближайшее время перед сдачей мазка.

В остальном женщина может вести обычный образ жизни: не требуется ограничений ни по питанию, ни по физической активности.

Как берут мазок у женщин

Взятие у женщины мазка на флору, на скрытые инфекции и на онкоцитологию несколько различается. Во всех случаях перед процедурой женщина проходит общий гинекологический осмотр на кресле с помощью зеркала.

При мазке на флору после визуальной оценки стенок влагалища врач специальным стерильным шпателем осуществляет забор материала из трех участков — влагалища, шейки матки и наружного отверстия мочеиспускательного канала. В некоторых случаях забор производится только с двух первых участков. Взятый шпателем материал равномерно широким мазком распределяется по стерильному предметному стеклу. Нанесение материала каплей, толстым слоем или небольшим мазком считается неправильным, поскольку затрудняет работу врача-лаборанта. При этом материалы из разных участков должны наносится на стекло отдельно друг от друга. С обратной стороны стекла врач делает пометки о месте взятия мазка: U — мочеиспускательный канал, V — влагалище, С — шейка матки. После этого стекло высушивается и направляется в лабораторию на исследование.

При сдаче мазка у женщин на скрытые инфекции и на онкоцитологию забор материала производится специальной щеточкой или с помощью особых стерильных ватных тампонов. Перед взятием материала обязательно удаляют слизь, так как ее наличие может дать ложный результат. Поскольку большинство микроорганизмов являются внутриклеточными паразитами, точное обнаружение их возможно только при исследовании соскоба со стенок половых органов. При анализе на скрытые инфекции материал со щеточки помещают в физраствор, хранящийся в холодильнике. Мазок на онкоцитологию наносят на предметное стекло и высушивают.

Читайте также:  Что делать если чешется анальности у взрослого

Как правило, процедура забора мазка для женщины практически безболезненна. Неудобство может вызывать соприкосновение с гинекологическим зеркалом из-за разницы температур между телом и металлическим инструментом. При взятии материала тампоном или щеточкой с шейки матки может отмечаться незначительное болевое ощущение, которое проходит сразу после окончания манипуляции. Мазок на онкоцитологию иногда способен вызывать незначительные кровянистые выделения в течение двух-трех дней. Если возникают сильные кровотечения, повышение температуры, боли в животе, то необходимо срочно обратиться к гинекологу, поскольку такие симптомы при взятии мазка нормой не являются.

Что показывает анализ мазка у женщин: интерпретация результатов

После проведения анализа мазка пациентка получает результаты, которые полностью зависят от типа, назначенного ей исследования.

При расшифровке анализа мазка на флору необходимо знать показатели нормы:

  1. Плоский эпителий (пл.эп) — у здоровой женщины этот показатель не должен превышать 15 клеток в поле зрения. Большее их количество говорит о воспалительном процессе, а меньшее — о наличии гормональных нарушений.
  2. Лейкоциты (L) . Нормальное количество во влагалище — не более 10-ти, а в шейке матки не более 30-ти единиц.
  3. Палочки Дедерлейна , обеспечивающие нормальную микрофлору женских половых органов. В мазке здоровой женщины они должны присутствовать в большом количестве, поскольку их недостаток свидетельствует о нарушенной микрофлоре влагалища.
  4. Слизь должна присутствовать в мазке в умеренном количестве. Обильные выделения слизи — признак воспаления или инфекции.
  5. Грибки рода кандида, гонококки, трихомонады в мазке выявляться не должны. Их наличие свидетельствует о заболевании.

Кроме этих показателей в анализе может быть указана одна из четырех степеней чистоты влагалища. Нормальными являются только первая и вторая степень, третья и четвертая являются признаком заболевания половых путей.

Результаты анализа мазка на скрытые инфекции можно получить через 1–2 суток после сдачи. В некоторых случаях они могут быть готовы прямо в день прохождения процедуры. При помощи мазка выявляются следующие инфекции:

  • герпес-вирус человека 1 и 2 типов;
  • вирус Эпштейна-Барр;
  • цитомегаловирус;
  • герпес-вирус человека;
  • вирус папилломы человека;
  • бледная трепонема;
  • мобилункус;
  • бактероиды;
  • гонококк;
  • гарднерелла;
  • микоплазма;
  • уреаплазма;
  • хламидии.

Мазок на инфекции в большинстве случаев является достаточно надежной диагностической процедурой. С его помощью можно выявить большинство серьезных заболеваний половой сферы, при этом стоимость анализа является вполне доступной даже в частных клиниках.

Для выбора правильного метода лечения инфекционных заболеваний необходимо установить тип возбудителя. Стандартные мазки и бактериологическое исследование не всегда позволяют выявить инфекцию, а вирусы невозможно получить на питательных средах. Поэтому в гинекологии, в частности, используют ПЦР-анализ, который эффективен на этапе диагностики патологии и контроля лечения.

Полимеразная цепная реакция – это метод молекулярной биохимии, который разработал в 1983 г. американский ученый К. Мюллис. Но его основы заложили еще в 1970 годах норвежские ученые, которые разработали способ построения копий молекул ДНК. Американский ученый доработал метод, что позволило воспроизводить исходную молекулу любого генетического материала при помощи обработки специальным ферментом ДНК-полимеразой. Методика сделала переворот в молекулярной биохимии, а в 1996 году К. Мюллису за изобретение присудили Нобелевскую премию.

Особенности исследования

ПЦР-диагностика отличается от других методов исследования. В искусственных условиях производится копирование небольшого участка нуклеиновой кислоты. Реакция запускается только в случае, если в исследуемом образце есть компонент ДНК, который соответствует заданным условиям.

Создание копии нуклеиновых кислот похоже на аналогичный процесс в живом организме, но в клетках создается полный образец, а ПЦР запускает синтез небольшого короткого сегмента. Длина копируемых оснований в ходе исследования составляет не больше 3000 пар, тогда как у человека – больше 3 млрд пар.

В медицинской практике используются разные типы исследований. Изначально анализ ПЦР на ИППП позволял определить только присутствие патогенных микроорганизмов. В настоящее время разработан количественный анализ ПЦР, или в режиме реального времени, который выявляет изменение присутствия генетического материала в образце. Поэтому в результате отражается число колониеобразующих единиц бактерий или количество вирусов.

Полимеразная цепная реакция в гинекологии применяется для поиска следующих микроорганизмов:

  • хламидии;
  • уреаплазмы;
  • микоплазмы гоминис и гениталиум;
  • трихомонады;
  • гонококки;
  • цитомегаловирус;
  • герпес 1 и 2 типа;
  • ВПЧ;
  • гарднереллы;
  • кандиды.

Достоинства и недостатки методики

Полимеразная цепная реакция значительно упрощает диагностику инфекционных заболеваний, которые встречаются у гинекологических больных. К достоинствам исследования относится его высокая чувствительность. Некоторые заболевания могут иметь скрытый характер, не выявляются при помощи мазка и бактериологии, но протекают с периодическими клиническими проявлениями. Для получения положительного результата достаточно, чтобы в исследуемом материале присутствовало всего несколько фрагментов нуклеиновой кислоты. Высокая чувствительность позволяет выявить вирусные заболевания через короткое время после инфицирования, когда клинические симптомы еще отсутствуют.

Среди других положительных аспектов выделяют следующее:

  • для исследования подойдет любой биологический материал;
  • комплексность – после взятия одной пробы можно провести обследование на множество микроорганизмов;
  • высокая скорость – для получения копии генетического материала достаточно 5-7 часов, поэтому результат исследования выдается на руки в течение суток;
  • высокая точность позволяет избежать ложноположительных или ложноотрицательных реакций, которые часто возникают при иммунологическом исследовании из-за перекрестных реакций;
  • низкая стоимость реагентов делает исследование доступным для большинства лабораторий и пациентов.

К недостаткам комплексного анализа ПЦР относят высокие требования к получению биологического материала. Образцы должны быть взяты стерильными инструментами, на которых не будет присутствия внешнего загрязнения или других клеток. В помещении, где производят забор анализа, должны быть установлены качественные фильтры, которые очищают воздух на 99,9% от микробов, вирусов и фрагментов ДНК. Иначе результат может быть непредсказуемым.

Какой материал используют для диагностики

Для обследования на половые инфекции у женщин чаще всего берут мазок из заднего свода влагалища или уретры. Если взять отделяемое из преддверия влагалища, исследование может быть неверным. Большая часть микроорганизмов поселяется в глубине складок слизистой оболочки. На вульве вагинальная микрофлора может смешиваться с микроорганизмами с кожи, а у пациенток, активно использующих гигиенические ежедневные прокладки или носящих трусики-стринги, может присутствовать флора из прямой кишки.

Взятие мазка на ПЦР-анализ

Для исследования реже применяется моча. Диагностика вирусных инфекций проводится по образцу крови.

У женщин, родивших детей с признаками внутриутробной инфекции, после выкидыша, для диагностики может использоваться участок плаценты, материал абортуса.

Показания для обследования

Мазок на ПЦР назначают по определенным показаниям:

  1. Определения состава возбудителей при имеющихся клинических проявлениях острой инфекции.
  2. Хроническое воспаление половых органов с периодами обострений.
  3. Контроль проведенного лечения.

Точность диагностики в комплексном анализе помогает выявить полный спектр возбудителей и подобрать лекарственные препараты. Некоторые микроорганизмы чувствительны к узкому спектру антибиотиков. Например, трихомонады можно вылечить только Метронидазолом. Если его не назначить в составе комбинированной схемы, инфекция перейдет в хроническую форму. Но и превентивное назначение антибиотика плохо влияет на собственную микрофлору, увеличивает риски появления побочных реакций.

ПЦР-диагностика назначается женщинам с эрозией или эктопией шейки матки. Воспалительный процесс экзоцервикса часто связан с инфицированием вирусом папилломы человека. ВПЧ 16, 18, 33 типа относится к высокому онкогенному риску и способен вызвать атипическую трансформацию клеток, которая становится дисплазией и переходит в рак шейки матки. Поэтому необходимо проводить обследование, во время которого определяется тип возбудителя, чтобы строить прогнозы и подбирать лечение.

При постановке на учет по беременности анализ проводится для поиска инфекции, которая может повлиять на вынашивание плода. Обследование назначают при положительных иммунологических тестах, в которых выявляются иммуноглобулины, свидетельствующие о присутствии возбудителя. Воспроизводство копий ДНК уточняет присутствие возбудителя вне зависимости от реакции организма на него.

Читайте также:  Цистицерки свиного цепня

Беременным необходимо обследование на цитомегаловирус. Первичное инфицирование в период вынашивания ребенка приводит к невынашиванию и тяжелым порокам развития (о том, чем опасен цитомегаловирус во время беременности, мы уже рассказывали).

Подготовка пациентки

Для получения точного результата необходима правильная подготовка к сдаче анализа, которая зависит от типа исследуемого материала.

Кровь для анализа берут из вены строго натощак. Последний прием пищи должен быть вечером, оптимальный промежуток до забора материала должно пройти не менее 8 часов. Плохо влияют на состав крови жирная и острая пища, алкоголь, некоторые лекарственные препараты.

Моча сдается рано утром. Необходимо собрать ее до проведения гигиенических процедур в стерильную тару. В случае сомнительного качества собранной мочи, ее можно собрать при помощи уретрального катетера напрямую из мочевого пузыря.

Для исследования мазка из уретры или влагалища методом ПЦР, необходимо воздержаться от секса в течение нескольких дней. Запрещено проводить спринцевания и другие вмешательства, во время которых произойдет изменение состава флоры. Результат может оказаться неточным. Перед взятием материала нельзя мочиться 2 часа, чтобы не вымыть микроорганизмы струей мочи. Женщинам не берут анализы во время менструации и в течение 2 дней после ее окончания.

Как выполняется ПЦР

То, как берут мазок, мало отличается от обычного забора отделяемого из влагалища. Процедура выполняется на гинекологическом кресле. Диагностика проводится в ближайшее время, но исследуемый материал может сохраняться долгое время.

Сама реакция состоит из нескольких этапов. Ее проводят в специальном приборе – амплификаторе. В нем происходят циклы нагревания и охлаждения с высокой точностью температуры. Чтобы биологический материал не испарялся, к смеси добавляют вазелиновое масло.

Для проведения полимеразной цепной реакции используют следующие компоненты:

  • ДНК-матрица, которая содержит участок нуклеиновой кислоты, требующий воспроизведения;
  • два праймера – коротких участка нутклеотда, которые нужны для воспроизводства матричной цепочки;
  • термостабильный фермент ДНК-полимераза;
  • нуклеозидфосфаты;
  • магний в состоянии ионов;
  • буферный раствор, который обеспечивает необходимую кислотность среды, содержит соли, бычий сывороточный альбумин.

Все исследование проходит в три стадии. Сначала выполняется денатурация. Матрицу ДНК нагревают до 98°С, чтобы ее две цепочки разошлись. Для разогрева достаточно от 30 секунд до 2 минут. Во время денатурации происходит разрушение водородных связей в молекуле, она теряет структуру двойной спирали. В некоторых случаях проводится и предварительный разогрев праймеров. Этот тип исследования называют горячим стартом, он помогает снизить количество побочных продуктов реакции.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

После денатурации запускается отжиг. В это время температуру смеси начинают снижать. Обычно она уменьшается на 4-5°С от исходной. Праймеры присоединяются к одноцепочечной ДНК. Их подбирают с определенным составом, который помогает выделить и отграничить исследуемый участок нуклеиновой кислоты. Эта стадия длится 0,5-2 минуты. Если температура подобрана неверно, праймеры могут не образовать связь с нужным участком молекулы или привязаться в неверном месте и образовать неверные продукты.

Последняя стадия – элонгация. Во время прохождения этого этапа подбирается оптимальная температура, которая подходит для используемой дезоксинуклеотидтрифосфаты. На каждую тысячу пар образующихся оснований нужно около 1 минуты. Этот этап длится 7-10 минут.

Этот цикл повторяется несколько раз.

Сколько по времени делается исследование?

Все зависит от поиска конкретного возбудителя, характера образца и количества искомых инфекций. Для получения ответа необходимо провести не менее 30 полных циклов амплификации, при длительности одного до 15 минут. Поэтому для получения результата нужно до 7 часов, а иногда и больше. Ответ выдается пациенту или отправляется лечащему врачу не позднее, чем через сутки после забора материала.

Результаты анализа и их расшифровка

Что показывает ПЦР-анализ, зависит от цели исследования. При качественном исследовании в бланке указывается наличие или отсутствие ДНК искомого возбудителя. Положительный результат обозначает присутствие инфекции, а отрицательный – отсутствие генетического материала.

Количественное ПЦР позволяет определить в режиме реального времени число молекул ДНК возбудителя. Это необходимо для диагностики условно-патогенных микроорганизмов, которые не требуют лечения в низких концентрациях. Такой подход применяют при диагностике уреа- и микоплазм.

Хламидии

Обследование на различные типы инфекции имеет свои особенности и показания. Анализ ПЦР на хламидии проводят чаще остальных. Это связано с широким распространением инфекции, бессимптомным течением у 60% женщин и большим количеством осложнений при хроническом инфекционном процессе. Обследоваться рекомендуется в следующих случаях:

  • острые проявления вульвовагинита неясной этиологии;
  • установление причины хронического воспаления половых органов;
  • бесплодие;
  • контроль эффективности лечения;
  • скрининговое обследование.

Скрининг необходим у пациенток из групп риска, чтобы исключить бессимптомное носительство хламидий. Контроль излеченности проводится не ранее, чем через месяц после прохождения курса антибиотикотерапии.

Беременным предварительно проводится ИФА, чтобы определить наличие антител к хламидиям. Это обследование рекомендуется пройти в плане прегравидарной подготовки, чтобы при инфицировании провести лечение до наступления беременности и снизить риски осложнений как от самого возбудителя, так и от приема антибиотиков.

Уреаплазмы

Уреаплазмоз относится к инфекциям, вызванным условно-патогенной микрофлорой. Лечение не проводится при количестве менее, чем 10Х4 КОЕ. Но при наличии клинических проявлений хронического воспаления, которое плохо поддается лечению, беременным назначается антибиотикотерапия. Оптимально пройти исследование на этапе планирования беременности для уменьшения риска для плода. ПЦР на уреаплазмоз относится к обязательным исследованиям при бесплодии.

ВПЧ

Папилломавирусы приводят к появлению предраковых изменений шейки матки, но не все типы обладают таким потенциалом. Высоким онкогенным риском отличаются 16 и 18 типы, несколько ниже 33, 31, 51,52 и другие. А ВПЧ 6, 11, 42 типа становятся причиной остроконечных кондилом и редко обнаруживается в злокачественных опухолях. Анализ необходим при дисплазии шейки матки, входит в пакет скринингового обследования.

Герпес

Для исследования может использоваться не только кровь, но и соскоб со слизистой оболочки половых органов. Обследование проводят:

  • при подготовке к беременности;
  • диагностированной ВИЧ-инфекции;
  • боли при мочеиспускании и отсутствии признаков бактериальной инфекции;
  • для дифференциальной диагностики генитальных инфекций.

В крови вирус определяется на 4 сутки после инфицирования. Он относится к хроническим инфекциям, которые могут иметь длительный период ремиссии и находиться в дремлющем состоянии в спинальных ганглиях.

Кандиды

Урогенитальный кандидоз в 15% случаев протекает в хронической форме. Иногда во время появления зуда и жжения в мазке не обнаруживаются клетки гриба или его гифы. Обследование и последующая расшифровка ПЦР-мазка помогает установить грибковую инфекцию. Анализ может определить тип кандид для подбора противогрибкового препарата.

Трихомонады

Одноклеточный микроорганизм не всегда можно обнаружить в мазке, но при этом у женщины будут присутствовать признаки хронического воспаления, ощущение зуда и жжения половых органов. Исследование необходимо при поиске причин бесплодия, цистите, эндометрите неясной этиологии, длительном воспалении.

В гинекологии анализ ПЦР используется в составе комплексной диагностики ИППП. Это достоверный метод определения возбудителя по фрагментам ДНК. Производится забор венозной крови или отделяемого из влагалища. Длительность проведения анализа – сутки.

Часто требуется проверка иммунного ответа организма на инфекцию, по присутствию определенных антител можно установить давность инфицирования и этап течения болезни, что не позволяет сделать ПЦР.

Adblock detector